Polyphenol Oxidase Assay Kit (Microanalysis)

PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在410nm有特征光吸收。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、样品处理：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0115M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0115M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织样品：按照组织质量（g）：CB0115M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0115M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）或果汁样本的处理：
按照血清（浆）或果汁体积（mL）：CB0115M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取 0.1mL血清（浆）或果汁加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 410nm，蒸馏水调零。
2.样本测定，在 EP 管中按照下表操作：

四、PPO 活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.血清(浆)或果汁 PPO 活性
单位的定义：每分钟每 mL 血清(浆)或果汁在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化0.01 为一个酶活力单位。
PPO (U/mL) =ΔA×V反总÷(V 液× V样÷V样总)÷0.01÷T = 60×ΔA÷V 液
2.组织、细菌或细胞 PPO 活性
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每分钟每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
PPO (U/mg prot) =ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T = 60×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位定义：每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
PPO (U/g 鲜重) = ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T = 60×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活力单位。
PPO (U/10⁴ cell) = ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T = 0.12×ΔA
注： V反总：反应体系总体积，0.3mL；V 液：加入血清(浆)或果汁体积，0.1mL；V样：加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1.血清(浆)或果汁 PPO 活性
单位的定义：每分钟每 mL 血清(浆)或果汁在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化0.005 为一个酶活力单位。
PPO (U/mL) = ΔA×V反总÷(V 液× V样÷V样总)÷0.005÷T = 120×ΔA÷V 液
2.组织、细菌或细胞 PPO 活性
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每分钟每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.005 为一个酶活力单位。
PPO (U/mg prot) = ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.005÷T = 120×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位定义：每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使410nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
PPO (U/g 鲜重) = ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T = 120×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.005 为一个酶活力单位。
PPO (U/10⁴ cell) = ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T = 0.24×ΔA
注： V反总：反应体系总体积，0.3mL；V 液：加入血清(浆)或果汁体积，0.1mL；V样：加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量(g)；500：细胞或细菌总数，500 万。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。