PAO Assay Kit (Spectrophotometry)

PAO催化多胺氧化产生过氧化氢，在过氧化氢酶存在的条件下与底物显色，在550nm下有特征吸收峰，通过测定吸光值增加速率来反映PAO活性。

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

二、酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0216S-A体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0216S-A），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：CB0216S-A体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0216S-A），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2.样本测定表

四、PAO活性计算：
1.按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO (U/mg prot) = ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.002÷T = 166.67×ΔA÷Cpr
2.按样本鲜重计算：
单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO (U/g 鲜重) = ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.002÷T = 166.67×ΔA÷W
3.按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO (U/10⁴ cell) = ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.002÷T = 0.333×ΔA
4.按液体体积计算：
单位的定义：每mL液体样本在每mL反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO (U/mL) = ΔA×V反总÷V样÷0.002÷T = 166.67×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。