Neutral Xylanase Assay Kit (Microanalysis)

NEX 在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与 3,5-二 硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，可计算 NEX 活力。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.发酵液：发酵液于 8000g，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样品。
2.酶干粉：称约 0.1mg，加缓冲液 1mL，震荡溶解待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 540nm。
2.CB0175M-B、CB0175M-C和CB0175M-D置于 30℃水浴保温 30min。
3.在0.5 mL EP 管中按顺序加入下列试剂：

四、中性蛋白酶活性计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y =1.6904x + 0.0058，R² = 0.9989
1.发酵液 NEX 活力计算
酶活定义：50℃，pH6.0 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX活力 (nmol/min/mL) = (A540-0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×1000 = 657×(A540-0.0058)
2.酶干粉 NEX 活力计算
酶活定义：50℃，pH6.0 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力 (nmol/min/mg) = (A540-0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×1000÷W = 657×(A540-0.0058)÷W
注： 150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V反总÷V样=300µL÷60µL=5；1000：转化因子，即 1mmol/L=1000μ mol/L；W：样本质量，mg。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
1.发酵液 NEX 活力计算
酶活定义：50℃，pH6.0 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力 (nmol/min/mL) = (A540-0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀释倍数×1000 = 1314×(A540-0.0058)
2.酶干粉 NEX 活力计算
酶活定义：50℃，pH6.0 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力 (nmol/min/mg) = (A540-0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀释倍数×1000÷W = 1314×(A540-0.0058) ÷W
注： 150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V反总÷V样=300µL÷60µL=5；1000：转化因子，即 1mmol/L=1000μ mol/L；W：样本质量，mg。

1.吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变；也可以延长或者缩短反应时间。
2.试剂盒 2-8℃保存，保质期 3 个月，建议尽快使用。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。