Name: Na+K+-ATPase Assay Kit (Visible Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0097V
Rating: 5 (4 reviews)

规格

价格

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数量

50 T

¥ 264

4-6日内发货

产品规格

50T/24S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0097V-ES	50mL×1 瓶	4℃保存；
CB0097V-A	10mL×1 瓶	4℃保存；
CB0097V-B	5mL×1 瓶	4℃保存；
CB0097V-C	5mL×1 瓶	4℃保存；
CB0097V-D	粉剂×3 瓶	-20℃保存。用时每支加 1mL 蒸馏水，现用现配。用不完的试剂-20℃可保存一周。
CB0097V-E	5mL×1 瓶	4℃保存；
CB0097V-F	粉剂×1 瓶	4℃保存；用时加入 3mL 蒸馏水，4℃保存。
CB0097V-G	粉剂×1 瓶	4℃保存；用时加入 25mL 蒸馏水，溶解后 4℃保存一周。
CB0097V-H	粉剂×1 瓶	4℃保存；用时加入 25mL 蒸馏水，溶解后 4℃保存一周。
CB0097V-I	25mL×1瓶	室温保存。
CB0097V-Standard	1mL×1 瓶	10μmol/mL标准磷贮备液，4℃保存。
标准磷应用液（0.5μmol/mL）配制：将CB0097V-标储用蒸馏水20 倍稀释充分混匀即可。
定磷剂的配制：按 H₂O：CB0097V-G：H：I = 2：1：1：1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.组织样本的制备：
按照组织质量（g）：CB0097V-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0097V-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌或细胞样本的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0097V-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0097V-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤

1.分光光度计预热 30min，调节波长到 660nm，蒸馏水调零。
2.酶促反应：在 EP 管中加入下列试剂：

试剂名称	对照管（μL）	测定管（μL）
CB0097V-A	130	90
CB0097V-B	40	40
CB0097V-C	40	40
CB0097V-D	40	40
CB0097V-E		40
样本		200
混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）准确水浴 10min
CB0097V-F	50	50
样本	200
混匀，8000g，25℃离心 10min，取上清液

3.定磷（在1.5ml EP 管中加入下列试剂：）

上清液	空白管（μL）	标准管（μL）	对照管（μL）	测定管（μL）
标准磷应用液（0.5μmol/mL）		100
上清液（μL）			100	100
蒸馏水	100
定磷试剂	1000	1000	1000	1000
混匀，室温放置 30min，在 660nm 处，记录各管吸光值A：A空白管、A标准管、A对照管、A测定管。

4.注意：
1.由于每一个样都必须做对照，本试剂盒50 管保证测 24 份 Na⁺K⁺- ATP 酶。
2.此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格无磷。
3.空白管和标准管只要各做1-2管。

四、Na⁺K⁺- ATP 酶活性计算：
1.血清(浆)Na⁺K⁺-ATP酶活力的计算：
定义：每小时每毫升血清(浆)中 Na⁺K⁺-ATP酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Na⁺K⁺-ATP酶活力 (U/mL) = [C 标准管×V 总]×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷V样÷T =7.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
2.组织、细菌或细胞中 Na⁺K⁺-ATP酶活力的计算：
(1)按蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白中 Na⁺K⁺-ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Na⁺K⁺-ATP酶活力 (U/mg prot) = [C 标准管×V 总]×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(Cpr×V样)÷T =7.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
定义：每小时每克组织中 Na+K+-ATP酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP酶活力 (U/g) = [C 标准管×V 总]×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(V样÷V样总×W)÷T=7.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
定义：每小时每 1 万个细菌或细胞中 Na+K+-ATP酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP酶活力 (U/10⁴ cell) = [ C 标准管×V 总]×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(500×V样÷V样总)÷T = 0.015×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
注： C 标准管：标准管浓度，0.5μmol/mL；V 总：酶促反应总体积，0.5mL；V样：加入样本体积，0.2mL ；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1/6 小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。