Name: Na+K+-ATPase Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0097M
Rating: 5 (4 reviews)

规格

价格

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数量

100 T

¥ 396

4-6日内发货

产品规格

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0097M-ES	100mL×1 瓶	4℃保存；
CB0097M-A	10mL×1 瓶	4℃保存；
CB0097M-B	粉剂×1 瓶	-20℃保存；临用前加入 6mL 蒸馏水充分混匀待用；用不完的试剂 4℃保存一周；
CB0097M-C	2mL×1 瓶	4℃保存。
CB0097M-D	粉剂×1 瓶	4℃保存。用时加入 3mL 蒸馏水，4℃保存。
CB0097M-E	粉剂×1 瓶	4℃保存。用时加入 5mL 蒸馏水，溶解后 4℃保存一周。
CB0097M-F	粉剂×1 瓶	4℃保存。用时加入 5mL 蒸馏水，溶解后 4℃保存一周。
CB0097M-G	5mL×1瓶	室温保存。
CB0097M-ES	1mL×1 瓶	10mmol/L标准磷贮备液，4℃保存。
标准磷应用液（0.5μmol/mL）配制：将CB0097M-(标储)用蒸馏水20 倍稀释充分混匀即可。
定磷剂的配制：按 H₂O：CB0097M-E：F：G = 2：1：1：1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：

1.组织样本的制备：
按照组织质量（g）：CB0097M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0097M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌或细胞样本的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0097M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0097M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤
1.分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 660nm，蒸馏水调零。
2.酶促反应：在 EP 管中加入下列试剂：

试剂名称	对照管（μL）	测定管（μL）
CB0097M-A	65	45
CB0097M-B	60	60
CB0097M-C		20
样本		100
混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）准确水浴 10min
CB0097M-D	25	25
样本	100
混匀，8000g，25℃离心 10min，取上清液

3.定磷（在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂：）

上清液	空白管（μL）	标准管（μL）	对照管（μL）	测定管（μL）
标准磷应用液（0.5μmol/mL）		20
上清液（μL）			20	20
蒸馏水	20
定磷试剂	200	200	200	200
混匀，室温放置 30min，在 660nm 处，记录各管吸光值A：A空白管、A标准管、A对照管、A测定管。

4.注意：
1.由于每一个样都必须做对照，本试剂盒 100 管保证测 48 份 Na⁺K⁺- ATP 酶。
2.此法具有微量、灵敏、快速的特点，所以对测定所用试管要求严格无磷。
3.空白管和标准管各只要做1-2管。

四、Na⁺K⁺- ATP 酶活性计算：
1.血清(浆)Na+K+-ATP酶活力的计算：
定义：每小时每毫升血清(浆)中 Na+K+-ATP酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP酶活力 (U/mL) = [C 标准管×V 总]×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷V样÷T =7.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
2.组织、细菌或细胞中 Na+K+-ATP酶活力的计算：
(1)按蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白中 Na+K+-ATP酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP酶活力 (U/mg prot) = [C 标准管×V 总]×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(Cpr×V样)÷T =7.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
定义：每小时每克组织中 Na+K+-ATP酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP酶活力 (U/g 鲜重)
= [ C 标准管×V 总]×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(W× V样÷V样总)÷T
=7.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
定义：每小时每 1 万个细菌或细胞中 Na+K+-ATP酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP酶活力 (U/10⁴ cell)= [ C 标准管×V 总]×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(500×V样÷V样总)÷T = 0.015×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
注： C 标准管：标准管浓度，0.5μmol/mL；V 总：酶促反应总体积，0.25mL；V样：加入样本体积，0.1mL ；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1/6 小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。