MCS Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

甲基柠檬酸合酶催化丙酰CoA和草酰乙酸产生甲基柠檬酰辅酶A，进一步水解产生甲基柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在 412nm处有特征吸光值。

25T/24S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水。

二、样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1.称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL CB0240V-A和10μL CB0240V-C，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2.将匀浆600g，4℃离心5min。
3.弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4.上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的CS（此步可选做）。
5.在步骤4中的沉淀中加入200μL CB0240V-B和2μL CB0240V-C，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体CS测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2.将CB0240V-D、CB0240V-E、CB0240V-F和CB0240V-G在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min。
3.样本测定：

四、MCS含量计算：

1. 按样本蛋白浓度计算

单位定义： 每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。

公式：
MCS (nmol/min/mg prot) = [ΔA × V_反总 ÷ (ε × d) × 10⁹] ÷ (V_样 × C_pr) ÷ T
= 1100 × ΔA ÷ C_pr

2. 按样本鲜重计算

单位定义： 每 g 组织每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。

公式：
MCS (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA × V_反总 ÷ (ε × d) × 10⁹] ÷ (W × V_样 ÷ V_样总) ÷ T = 222.2 × ΔA ÷ W

3. 按细菌或细胞密度计算

单位定义： 每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。

公式：
MCS (nmol/min/10⁴ cell) = [ΔA × V_反总 ÷ (ε × d) × 10⁹] ÷ (500 × V_样 ÷ V_样总) ÷ T = 0.4444 × ΔA

注：
V_反总：反应体系总体积，9×10^-4 L；
ε：TNB 摩尔消光系数，1.36×10⁴ L/mol/cm；
d：比色皿光径，1 cm；
V_样：加入样本体积，0.03 mL；
V_样总：加入提取液体积，0.202 mL；
T：反应时间，2 min；
C_pr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数，500 万。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。