IAAO Assay Kit (Microanalysis)

在无机酸存在情况下，吲哚乙酸能与FeCl3作用，生成红色螯合物，该物质在530nm处有最大吸收峰，酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1.5mL 离心管和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0210M-A体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0210M-A）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：CB0210M-A体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0210M-A），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到530nm，蒸馏水调零。
2.CB0210M-B、CB0210M-C、CB0210M-D置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温20min。
3.在EP管中依次加入下列试剂：

四、IAA氧化酶活性计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
IAA标准曲线公式：y =1.334x + 0.025 R² = 0.998 (x 为 IAA 浓度，mmol /L；y 为吸光值)
1.按蛋白浓度计算
酶活定义：从开始时加入的 IAA 量减去酶作用后残留的 IAA 含量，即得被酶所催化的 IAA
含量。以每 mg 酶蛋白在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U (μmol/h/mg prot) = [(A1-0.025)÷1.334-(A2-0.025)÷1.334] ×V样÷(V样×Cpr)÷T =1.5×(A1-A2)÷Cpr
2.按样本鲜重计算
酶活定义：以每 g 样本在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U (μmol/h/g 鲜重) = [(A1-0.025)÷1.334-(A2-0.025)÷1.334] ×V样÷(V样÷V样总×W)÷T =1.5×(A1-A2)÷W
3.按细胞数量计算
酶活定义：以每 1 万个细胞在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U (μmol/h/10⁴ cell) = [(A1-0.025)÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V样÷(V样÷V样总×W)÷T =1.5×(A1-A2)÷细胞数量
4.按液体体积计算
酶活定义：以每 mL 酶液在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U (μmol/h/mL) = [(A1-0.025)÷1.334-(A2-0.025)÷1.334]×V样÷(V样÷V样总)÷T =1.5×(A1-A2)
注：V样总：上清液总体积，1mL；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g，T：反应时间，0.5h。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
IAA标准曲线公式：y = 0.667x + 0.025 R² = 0.998 (x 为 IAA 浓度，mmol /L；y 为吸光值)
1.按蛋白浓度计算
酶活定义：从开始时加入的 IAA 量减去酶作用后残留的 IAA 含量，即得被酶所催化的 IAA含量。以每 mg 酶蛋白在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U (μmol/h/mg prot) = [(A1-0.025)÷0.667-(A2-0.025)÷0.667]×V样÷(V样×Cpr)÷T=3×(A1-A2)÷Cpr
2.按样本鲜重计算
酶活定义：以每 g 样本在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U (μmol/h/g 鲜重) = [(A1-0.025)÷0.667-(A2-0.025)÷0.667]×V样÷(V样÷V样总×W)÷T = 3×(A1-A2)÷W
3.按细胞数量计算
酶活定义：以每 1 万个细胞在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U (μmol/h/10⁴ cell) = [(A1-0.025)÷0.667-(A2-0.025)÷0.667]×V样÷(V样÷V样总×W)÷T = 3×(A1-A2)÷细胞数量
4.按液体体积计算
酶活定义：以每 mL 酶液在 1h 内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U (μmol/h/mL) = [(A1-0.025)÷0.667-(A2-0.025)÷0.667]×V样÷(V样÷V样总)÷T = 3×(A1-A2)
注：V 样总：上清液总体积，1mL；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g，T：反应时间，0.5h。

1.最低检出限为 0.01μmol/mL。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。