Free Cholestenone Assay Kit (Spectrophotometry)

FC氧化酶催化FC生成△4-胆甾烯酮和H₂O₂，过氧化物酶催化H₂O₂、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物，在500nm有吸收峰，其颜色深浅与FC含量成正比。

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、异丙醇和蒸馏水。

二、游离胆固醇提取：
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细 胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声2秒，间隔3秒，总时间3min）； 然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 500 nm，蒸馏水调零。
2.按需取出一定量的工作液，并在 37℃水浴中预热 30min，其余的 4℃保存。
3.在1mL玻璃比色皿中依次加入下列试剂：

注意：空白管、标准管分别只需做 1-2 个。

四、FC 含量的计算：
1.血清（浆）中 FC 含量计算
FC 含量 (μmol/dL) = C 标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)×100
= 200×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)
C 标准液：2 μmol/mL；100：单位换算系数1dL=100 mL
2.组织中 FC 含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算
FC 含量 (μmol/mg prot) = C 标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)×V样总÷
(Cpr×V样总)÷Cpr = 2×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
FC 含量 (μmol/g 鲜重) = C 标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)×V样总÷W
= 2×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)÷W
注： C 标准液：2 μmol/mL；V样总：加入提取液的体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g
3.细胞、细菌中 FC 含量计算
FC 含量 (μmol/10⁴ cell) = C 标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)×V样总
÷500= 0.004×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)
注：C 标准液：2 μmol/mL；500：细菌或细胞数量，500万；V样总：加入提取液的体积，1mL

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。