FPA Assay Kit (Microanalysis)

滤纸酶水解滤纸产生的还原糖能与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物，在540nm处有最大光吸收，在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比，可测定计算得滤纸酶的活力。

100T/48S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、研钵、低温离心机、恒温水浴锅。

二、酶液提取：
1.组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，冰浴匀浆后于4℃，12000rpm离心10min，取上清置于冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：蒸馏水体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL蒸馏水），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，12000rpm离心10min，取上清置于冰上待测。
3.培养液或其它液体：直接检测。

三、测定步骤：
1.根据样本数量取两倍数量的滤纸条和EP管，每支EP管中放入一个卷状滤纸条（注意要放入底部），作为底物。
2.将 10 mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 2、1.6、1.2、0.8、0.5、0.2mg/mL 的标准溶液备用。
3.按照下表操作：

四、酶活性计算公式：
标准曲线的绘制：

根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA 标准（y，ΔA 标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测 定（y，ΔA 测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。
酶活性的计算：
1.按蛋白浓度计算

酶活定义：每 mg 蛋白每分钟分解滤纸产生 1 mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
FPA 酶活（U/mg prot）=x×V 提取÷（V 提取×Cpr）÷T=0.0333x÷Cpr
2.按样本质量计算

酶活定义：每 g 样品每分钟分解滤纸产生 1 mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
FPA 酶活（U/g 质量）=x×V 提取÷W÷T=0.0333x÷W
3.按照细胞或细菌数量计算

酶活定义：每 10⁴ 个细胞每分钟分解滤纸产生 1 mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
FPA 酶活（U/10⁴ cell）=x×V 提取÷细胞数量（万个）÷T=0.0333x÷细胞数量（万个）
4.按液体体积计算

酶活定义：每 mL 样本每分钟分解滤纸产生 1 mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
FPA 酶活（U/mL）=x×V 样÷V 样÷T=0.0333x
注：V 提取：提取液（蒸馏水）体积，1 mL；V 样：加入的样本体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，
蛋白浓度自行测定；W：样本质量，g；T：反应时间，30 min。

1.用干净的镊子取出滤纸条，带手套卷成卷放入EP管底部。
2.样本灭活时保证同一批样本处理时间一致，建议沸水浴十分钟。
3.批量样本测定之前先做1-2个样本的预实验，若吸光值超过1.2，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。
4.显色后取检测液时注意枪头不要碰到滤纸条，以免带入毛状物，影响测定结果。
5.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• CB0079M-滤纸酶活性检测试剂盒（微量法）-中文(235 KB)