α-L-Af Assay Kit (Microanalysis)

α-L-Af分解对硝基酚阿拉伯呋喃糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-L-Af活性。

100T/48S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0233M-ES体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0233M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量（g）：CB0233M-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0233M-ES），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2.将 5 µmol/mL 的标准液用提取液稀释为2.5、2、1.5、1、0.5、0.25、0.1 µmol/mL 的标准溶液备用。
3.样本测定（在EP管或96孔板中依次加入下列试剂）：

四、α-L-Af活性计算：
1.标准曲线的绘制： 以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的 ΔA标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将 ΔA 带 入方程得到 x(nmol/mL)。
2.α-L-Af 活性的计算：
(1)按蛋白浓度计算
酶活定义：每 mg 蛋白每小时产生 1 nmol 对-硝基苯酚为 1 个酶活力单位。
α-L-Af 酶活(U/mg prot)=x×V提取÷(V提取×Cpr)÷T=2x÷Cpr
(2)按样本质量计算
酶活定义：每 g 样本每小时产生 1 nmol 对-硝基苯酚为 1 个酶活力单位。
α-L-Af 酶活(U/g 质量)=x×V提取÷W÷T=2x÷W
(3)按照细胞或细菌数量计算
酶活定义：每 104 个细胞每小时产生 1 nmol 对-硝基苯酚为 1 个酶活力单位。
α-L-Af 酶活(U/104 cell)=x×V提取÷细胞数量(万个)÷T=2x÷细胞数量(万个)
(4)按液体体积计算
酶活定义：每 mL 样本每小时产生 1 nmol 对-硝基苯酚为 1 个酶活力单位。
α-L-Af 酶活(U/mL)=x×V样÷V样÷T=2x
V提取：提取液体积，1 mL；V样：加入的样本体积，0.06 mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定；W：样本质量，g；T：反应时间，30 min。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。