蛋白 (抗体) 制备需要将其浓度调至 2 mg/mL，以确保最佳标记效果。1) 当蛋白溶液的 pH 值低于 8.0 时，用 1 M 碳酸氢钠调整，以达到 8.5±0.5。2) 当蛋白浓度低于 2 mg/mL 时，标记效率明显降低，建议浓度在 2-10 mg/mL。3) 请务必使用无伯胺（如 Tris 或甘氨酸）及无铵离子的缓冲液。染料应该将无水 DMSO 稀释 VF，制备 10 mg/mL 的储备溶液，通过玻璃管或旋涡充分混合。建议在 -20 ℃ 或 -80 ℃下避光保存染料溶液。所需 VF 的量根据待标记蛋白的量而定，最佳摩尔比为 10。如标记 500 μL 2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000)，用 100 μL DMSO 溶解 1 mg VF 染料，需 3.95 μL VF。计算如下（以 VF 488 为例）：1) mmol (IgG) = 2 mg/mL×0.5 mL/150,000 mg/mmol= 6.7×10 -6 mmol；2) mmol (VF 488) = mmol (IgG)×10 = 6.7×10 -6 mmol×10 = 6.7×10 -5 mmol；3) μL (VF 488) = mmol (VF 488)×MW (VF 488)/mg/μL (VF 488) = 5.6 μL (VF 488)。 标记反应步骤包括1) 缓慢将10 mg/mL VF 染料加入0.5 mL 蛋白样品中，轻轻混合后短暂离心。2) 避光、室温下孵育 60 分钟，中途需轻轻颠倒混合。蛋白纯化脱盐建议使用 Sephadex G-25 柱。制备步骤为：1) 按说明书准备柱子；2) 加入反应混合物；3) 样品达到树脂表面下方时，加 PBS (pH 7.2-7.4)；4) 完成柱纯化并收集所需组分。储存应在 -20℃ 避光。注意：1) VF 染料对光和湿度敏感，即用即配；2) 低浓度叠氮化钠或硫柳汞不会显著干扰标记，但高浓度甘油会降低效率；3) 避免含伯胺或铵离子缓冲液；4) 本产品仅供科学研究；5) 操作时请穿实验服并戴手套。