使用方法
一、溶液配置
1.储备液：将Super Fluor 647, SE溶解在DMSO中，配制成10 mM的储备液,并将储备液分装后储存于-80°C，避免反复冻融以保持其活性。
2. 工作液：在标记反应前，将储备液稀释至所需的工作浓度。具体浓度应根据待标记分子的浓度和实验要求进行优化。
二、操作步骤
标记反应
1.蛋白质溶解：将待标记的蛋白质溶解在合适的缓冲液中，确保蛋白质浓度适合标记反应，通常为1–10 mg/mL。
2.染料添加：在蛋白质溶液中缓慢加入适量的Super Fluor 647, SE溶液，确保蛋白质与染料的比例适当（根据具体实验需求进行优化）。
3. 反应孵育：避光室温下孵育反应混合物约1小时，期间可轻柔吹打以促进反应。
4 纯化与验证
纯化：标记反应完成后，使用适当的方法（如凝胶过滤、超滤或透析）去除未反应的游离染料，纯化标记后的蛋白质。
验证：通过测定蛋白质和染料的吸光度，计算标记效率（F/P值）。具体方法包括在280 nm和650 nm处测定吸光度，并根据公式计算蛋白质浓度和标记比例。
5.检测时，Super Fluor 647的激发波长约为650 nm，发射波长约为665 nm。