Fura-2钙染料染色皮质神经元的简化方案如下：
用乙酰氧基甲酯 Fura-2 （Fura-2 AM） 加载细胞，它扩散穿过细胞膜并被细胞酯酶脱酯产生 Fura-2 游离酸。Fura-2 加载的确切参数因细胞类型而异。建议通过制备几种含有 1-4 μM 的多种浓度 Fura-2 的上样溶液来测试各种条件，在上样溶液中孵育细胞 15 分钟至 2 小时的不同时间，并在室温和 37 度下测试上样量。
1.首先，将 50μl DMSO 添加到 Invitrogen 提供的 50μg 小瓶中，制备 1 mM Fura-2 AM 原液。使用在氮气下包装的干燥 DMSO 很重要，并且有必要通过刺穿隔膜来用针头去除 DMSO，以防止 DMSO 水化。配制 Fura-2 AM 溶液后，将其保存在黑暗干燥的地方。DMSO中的Fura-2 AM在室温下稳定24小时，在干燥容器中在-20度下稳定数月。
2.将 2 ml 培养基等分到15 ml锥形管中，加热至37度，然后加入2μl Fura-2 AM原液以生成1μM Fura-2 AM溶液。剧烈涡旋溶液1分钟。
3.将上样溶液转移到 35 毫米组织培养皿中，并将带有细胞的盖玻片转移到培养皿中。
4.将神经元在37度下在黑暗的培养箱中孵育30分钟。精确地安排孵育时间。
5.准备一个 35 毫米培养皿，其中包含 2 毫升组织培养基，不含 Fura-2 AM。从装载溶液中取出盖玻片并放入新培养皿中。
6.将盖玻片安装在成像室上。从 35 mm 培养皿上取下盖玻片并快速安装到腔室上，确保防止细胞干燥。我们使用华纳仪器制造的成像室，允许将包含细胞的 10 毫米盖玻片安装在底部，第二个盖玻片安装在顶部，形成夹层。两个盖玻片用真空润滑脂固定在腔室上，腔室两端的两根管子允许溶液通过腔室灌注。输入管线连接到注射器，输出管线连接到孔，孔由连接到真空疏水阀的吸入管排空。[3]