Fluo-4 AM 储存液以 DMSO 溶解，配制为 1 mM，建议现配现用以保证活性。工作液使用含 0.04% Poloxamer 407 (F127) 的 HBSS 缓冲液稀释至 1 μM，避光现配。取每组样本约 1×10⁶ 个细胞，3000×g 离心 5 分钟（4℃）收集，PBS 洗涤一次后用 0.5 mL PBS 重悬，并加入 0.5 μL Fluo-4 AM（终浓度 1 μM），于 37℃ 避光孵育 1 小时。随后用 PBS 洗涤细胞 3 次（3000×g，2 分钟），最终重悬于 1 mL PBS 中。通过流式细胞术检测荧光强度（激发/发射波长为 485/526 nm），用于评价胞内钙离子水平。[1]