DiR iodide (DiR iodide [1,1‘-dioctadecyl-3,3,3’,3‘-tetramethylindotricarbocyanine iodide]) is an important near infrared (NIR) fluorescent dye, which has been widely used for in vivo monitoring of cells.

染色贴壁细胞：在无菌玻璃盖玻片上培养贴壁细胞。从生长培养基中取出盖玻片，并轻轻去除多余的培养基。将盖玻片放入湿度箱中。向盖玻片的一角滴加100 μL染色工作液，并轻轻摇晃使所有细胞均被覆盖。在37℃下孵育盖玻片2-20分钟。去除染色工作液，并用预热的生长培养基清洗盖玻片两到三次。显微镜检测：使用DiI（549/565 nm，XF32-Omega，31002-Chroma）；DiR（748/780 nm，XF112-Omega，41009-Chroma）进行检测。

使用方法：
一、溶液配制
1.母液配置：将DiR iodide 使用DMSO配制，浓度为 1-5 mM。
2. 工作液配置：将母液稀释到合适的缓冲液如无血清培养基、HBSS 或 PBS 配制成 1 至 5 μM 的工作液。
二、悬浮细胞
1.1000 g 4℃离心 3-5 分钟，弃上清，PBS洗2次，每次5分钟。细胞密度为 1×10^6/mL。
2.加入 1 mL Di 工作液，室温孵育5-30分钟。
3. 4℃，400g离心3-4分钟，弃上清。
4.用PBS洗涤2次，每次5分钟。
5.用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，荧光显微镜或流式细胞术观察。
三、贴壁细胞
1.在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
2.从培养基上取下盖玻片并吸出多余的培养基。
3.加入100 μL工作液，轻摇使之完全覆盖细胞，室温孵育5-30分钟。
4.用培养基洗两次，每次5分钟。通过荧光显微镜或流式细胞仪观察。