Dabcyl acid (DABCYL) is the original dark fluorescence quencher.

一、荧光共振能量转移（FRET）实验
a.试剂准备：合成或购买 DABCYL 标记的供体分子和与之匹配的荧光团标记的受体分子，如 FITC 等。准备合适的缓冲液，如 PBS 等。
b.实验步骤：
1.将标记好的供体和受体分子分别溶解在缓冲液中，配制成适当浓度的溶液。
2.在比色皿或荧光酶标板中，依次加入适量的供体溶液和受体溶液，使二者终浓度达到实验设计要求，如供体浓度为 10 nM，受体浓度为 20 nM 等。
3.使用荧光光谱仪，设置合适的激发波长和发射波长范围，先单独扫描供体和受体的荧光光谱，然后扫描二者混合后的荧光光谱，观察 FRET 现象，即供体荧光强度的降低和受体荧光强度的增强。
二、蛋白质标记及活性检测实验
a.试剂准备：将 DABCYL-NHS 酯溶解在无水有机溶剂如 DMF 或 DMSO 中，配制成一定浓度的溶液。准备待标记的蛋白质溶液，置于合适的缓冲液中，如 Tris-HCl 缓冲液等。
b.实验步骤：
1.取适量的蛋白质溶液，缓慢滴加 DABCYL-NHS 酯溶液，使 DABCYL 与蛋白质的摩尔比达到预定值，如 1:5 等，在室温或 4℃下搅拌反应 1-2 小时。
2.反应结束后，通过透析或凝胶过滤等方法去除未反应的 DABCYL。
3.标记后的蛋白质可通过 SDS-PAGE 等方法检测其标记效率，同时可进行相应的活性检测，如酶活性测定等，以评估标记对蛋白质活性的影响 。
三、细胞摄取实验
a.试剂准备：合成 DABCYL 标记的细胞穿透肽或其他载体分子，溶解在细胞培养基或 PBS 中。准备相应的细胞株，如 HeLa 细胞等，并培养至对数生长期。
b.实验步骤：
1.将细胞接种于培养板中，培养至合适密度。
2.加入含有 DABCYL 标记分子的溶液，使终浓度达到设定值，如 10 μM 等，在 37℃、5% CO₂培养箱中孵育一定时间，如 1-4 小时。
3.孵育结束后，用 PBS 洗涤细胞，去除未摄取的标记分子。
4.可通过荧光显微镜观察细胞内的荧光分布，或使用流式细胞仪定量分析细胞对 DABCYL 标记分子的摄取量。