Biotinyl tyramide, a biotin derivative, is used for tyramide signal amplification, as a reagent to amplify both in situ hybridization and immunohistochemical signals protocols.

一、 溶液配制
1. 母液的配制：常见的浓度范围为 1 μM 到 10 μM，具体浓度可以根据样本类型、抗体浓度和所需信号强度进行优化。
2.过氧化物酶溶液：通常使用 HRP 标记的一抗（或其他过氧化物酶标记的抗体）。根据生产商的说明书稀释至合适的浓度。
二、 免疫标记和显色反应
1. 抗原修复：根据抗原的性质和所用抗体，可能需要进行抗原修复步骤（如热诱导抗原修复，HIER）。
2. 封闭：使用封闭液封闭组织或细胞切片，阻止非特异性结合。
3. 一抗孵育：将样本与标记了过氧化物酶的第一抗体孵育。通常孵育时间为 1-2 小时（可根据抗体的说明书优化）。
4. 二抗孵育（如果使用二抗）：将样本与标记过氧化物酶的二抗孵育，通常孵育时间为 30-60 分钟。
5. TSA 反应：加入 Biotinyl tyramide 溶液，孵育 10-30 分钟。TSA 反应需要过氧化物酶催化，因此确保过氧化物酶的活性。
6. 标记和显色：Biotinyl tyramide 与 HRP 反应，生成生物素，生物素进一步与亲和素标记的荧光或酶进行结合，产生可检测的信号（如荧光或染色反应）。
7. 洗涤：孵育后，使用洗涤缓冲液去除多余的试剂，确保信号清晰。
8. 可视化：使用显微镜观察结果，并根据需要进行染色。
注意事项：
1. 反应时间：Biotinyl tyramide 反应的时间需要根据所使用的过氧化物酶浓度以及样本类型优化，通常 10-30 分钟即可。
2. 优化浓度：过高的 Biotinyl tyramide 浓度可能导致信号过强，产生背景噪声，低浓度则可能导致信号过弱。
3. HRP 活性：确保过氧化物酶标记的抗体活性良好，否则可能导致反应效率降低。