TPI Assay Kit (UV Spectrophotometry)

Name: TPI Assay Kit (UV Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0302UV
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0302UV

别名 磷酸丙糖异构酶活性检测试剂盒（紫外分光光度法）

植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶（Triose-phosphate isomerase，TPI）是光合作用中参与calvin循环的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮之间的转化，磷酸二羟丙酮能快速透过叶绿体的包膜进入细胞质，并在其中逐步转化为蔗糖。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 1,814	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

磷酸丙糖异构酶将磷酸二羟丙酮转化为3-磷酸甘油醛，3-磷酸甘油醛与NAD在3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH，340nm处的吸光度变化反映了磷酸丙糖异构酶的活性的高低。

产品规格

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0302UV-ES-1	50mL×1瓶	4℃保存；
CB0302UV-ES-2	50mL×1瓶	4℃保存；
CB0302UV-A	30mL×1瓶	4℃保存；
CB0302UV-B	粉剂×1瓶	-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
CB0302UV-C	粉剂×1瓶	-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
CB0302UV-D	粉剂×1瓶	-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
紫外分光光度计、1 mL石英比色皿、天平、低温离心机、研钵、震荡仪。

二、酶液提取
1.总TPI酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL CB0302UV-ES-1，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定。
2.胞浆和叶绿体TPI酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL CB0302UV-ES-1），冰浴匀浆后于4℃，200g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆TPI酶活性，取沉淀加1mL CB0302UV-ES-2，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定叶绿体中TPI酶活性。
3.建议测定总TPI酶活性，按照步骤1提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的TPI，则按照步骤2提取粗酶液。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.取1mL石英比色皿，依次加入：

试剂名称	测定管（µL）
CB0302UV-A	600
CB0302UV-B	100
CB0302UV-C	100
CB0302UV-D	100
粗酶液	100
充分混匀，记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A2-A1

四、计算公式：
1.按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
TPI (nmol/min /mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 321.54×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
TPI (nmol/min /g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T = 321.54×ΔA÷W
注：V反总：反应体系总体积，1mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。