Total Cholestenone Content Assay Kit (Spectrophotometry)

利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇 (FC) 和游离脂肪酸 (FFA)，从而把胆固醇酯转化为 FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化 FC 氧化，生成△4-胆甾烯酮和 H₂O₂；最后利用过氧化物酶催化 H₂O₂ 氧化4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物；在 500nm 有特征吸收峰，其颜色深浅与 TC 含量成正比。

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、天平、水浴锅、离心机、可调式移液枪、蒸馏水、异丙醇。

二、总胆固醇提取：
1.组织中 TC 的提取：按照组织质量（g）：异丙醇体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 异丙醇）进行冰浴匀浆，10000g 4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2.细胞、细菌中 TC 的提取：先收集 500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加 1mL 异丙醇，超声波破碎 3min（功率 300w，超声 2s，停 3s），10000g 4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
3.血清（浆）等样品：直接测定。

三、测定步骤：
1.可见分光光度计预热 30 min，调节波长到 500 nm，蒸馏水调零。
2.按下表依次加入下列试剂：

四、TC计算公式：
1.血清（浆）中 TC 含量计算：
TC (mmol /L) = A1÷A2×C 标准液
2.组织、细胞中 TC 含量计算：
(1)按样本蛋白浓度计算
TC (mmol / mg prot) = A1÷A2×C 标准液÷Cpr
(2)按样本质量计算
TC (mmol / g 组织) =A1÷A2×C 标准液÷ W
C 标准液：5 mmol/L；样本蛋白浓度 Cpr，mg /mL；样本质量 W，g

1.标准品为醇溶性试剂，易挥发，96 孔板操作时尽量在加完样本后加标准品，且标准孔优先加入工作液以降低标准品的挥发，从而降低偏差。
2.试剂应防止葡萄糖、胆固醇等试剂的污染。
3.用提取液提取后的上清不能用于蛋白浓度测定；如需测定蛋白浓度，需另取组织。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。