Thioredoxin Peroxidase Assay Kit (UV Spectrophotometry)

TPX 催化 H₂O₂氧化二硫苏糖醇（DTT），H₂O₂的吸收波长为 240nm，通过测定 240nm 吸光度的下降速率，即可计算出 TPX 活性。

50T/24S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.细菌、细胞：按照500 万细菌或细胞加入 1mL CB0135UV-A，冰浴超声波破碎细菌或细胞（功率300W，超声 3s，间隔 7s，总时间3min）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0135UV-A，进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清等液体：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min，调节波长到240 nm，蒸馏水调零。
2.CB0135UV-A、B置于 25℃（其他物种）或37℃（哺乳动物）水浴中预热30min。
3.按顺序加入下列试剂：

注意：每个样品都需要做对照管，以减去过氧化氢酶（CAT）催化降解的 H₂O₂

四、TPX酶活性计算公式：
1.按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分钟催化 1nmol H₂O₂ 降解为 1 个酶活单位。
CAT 活性 (U/mg prot) = (A1-A2)÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V样)÷T = 573×(A1-A2)÷Cpr
总活性 (U/mg prot) = (A3-A4)÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V样)÷T = 573×(A3-A4)÷Cpr
TPX 活性 (U/mg prot) = 总活性-CAT活性
2.按样本质量计算
活性单位定义：25℃或者 37℃中，每克样本每分钟催化 1nmol H₂O₂ 降解为 1 个酶活单位。
CAT 活性 (U/g) = (A1-A2)÷ε÷d×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T = 573×(A1-A2)÷W
总活性 (U/g) = (A3-A4)÷ε÷d×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T = 573×(A3-A4)÷W
TPX 活性 (U/g) = 总活性-CAT 活性
3.按细胞数量计算
活性单位定义：25℃或者 37℃中，每10⁴个细胞每分钟催化 1nmol H₂O₂ 降解为1个酶活单位。
CAT 活性 (U/10⁴ cell) = (A1-A2)÷ε÷d×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T = 573×(A1-A2)÷细胞数量
总活性 (U/10⁴ cell) = (A3-A4)÷ε÷d×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T = 573×(A3-A4)÷细胞数量
TPX 活性 (U/10⁴ cell) = 总活性-CAT 活性
4.按液体体积计算
活性单位定义：25℃或者 37℃中，每毫升液体每分钟催化 1nmol H₂O₂ 降解为 1 个酶活单位。
CAT 活性 (U/mL) = (A1-A2)÷ε÷d×V反总÷V样÷T=573×(A1-A2)
总活性 (U/mL) = (A3-A4)÷ε÷d×V反总÷V样÷T=573×(A3-A4)
TPX 活性 (U/mL) = 总活性-CAT 活性
注：ε：H₂O₂ 的摩尔消光系数，43600 L/mol/cm=0.0436 L/μmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积(L)，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度(mg/mL)；V样：加入反应体系中上清液体积(mL)，20 μL=0.02 mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g；T：反应时间(min)，2min。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。