山梨醇在碱性溶液中与铜离子形成蓝色络合物，在 655nm 波长有特征吸收峰。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、山梨醇的提取：
1.组织样品的制备：
按照组织质量（g）：蒸馏水体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.2g 组织，加入 1mL蒸馏水），研磨成匀浆，95℃水浴 10 分钟（盖紧，以防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清液待测。
2.血清（浆）：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 655nm，蒸馏水调零。
2.微量石英比色皿或 96 孔板中依次加入下列试剂：

涡旋混匀，室温静置 15min，8000g，常温离心 10min，取 200ul 上清液测 655nm 处吸光
值 A，分别记为 A 标准、A 测定、A 空白。ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准
-A 空白。
注：标准曲线和空白管只需测 1-2 次。

四、山梨醇含量计算：

1. 根据标准品的浓度（y，mg/mL) 和吸光度 A（x，ΔA 标准)，建立标准曲线。根据标准曲线，将 A
   测定（x，ΔA 测定) 带入公式计算样本浓度 (y，mg/mL )。
2. 按照样本质量计算
   2 / 2
   山梨醇含量 (mg/g 鲜重) =yxV1÷(WxV1÷V2)=y÷W
3. 按照样本蛋白浓度计算
   山梨醇含量 (mg/mg prot) =y×V1÷(V1×Cpr) = y÷Cpr
   注：V1：加入样本体积，0.23mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
   W：样本质量，g

1.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定，计算公式中注意乘以稀释倍数
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。