ProDH Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

Name: ProDH Assay Kit (Visible Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0226V
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0226V

别名 脯氨酸脱氢酶活性检测试剂盒（可见分光光度法）

脯氨酸脱氢酶（Proline dehydrogenase, ProDH）是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。脯氨酸是分布最广泛的一种渗透物质，在胁迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯氨酸，降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 1,078	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

利用异硫氰酸甲酯检测ProDH催化的脱氢反应，600nm处吸光值的吸光值的变化反映酶活性的高低。

产品规格

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0226V-ES	60mL×1瓶	4℃保存；
CB0226V-A	2 mL×1支	4℃保存；
CB0226V-B	50 mL×1瓶	-20℃保存；
CB0226V-C	粉剂×1瓶	4℃保存；临用前加入8mL蒸馏水充分溶解待用，剩余试剂4℃保存；
CB0226V-D	粉剂×1瓶	4℃保存；临用前加入8mL蒸馏水充分溶解待用，剩余试剂4℃保存；
CB0226V-WS	临用前根据用量按照体积比（mL）：CB0226V-B：CB0226V-C：CB0226V-D = 7.2 : 0.9 : 0.9的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少），置于30℃水浴5min；
CB0226V-E	粉剂×5支	4℃保存；临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用，现配现用。

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.细菌、细胞样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0226V-ES体积（mL）为1500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0226V-ES），冰浴匀浆，1500g 4℃离心 15min，取上清液于一支新的 EP 管中，加入 10μL CB0226V-A，涡旋混匀，冰浴放置 30min 后，15000g 4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
2.按照组织质量（g）：CB0226V-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL CB0226V-ES），进行冰浴匀浆，1500g 4℃离心15min，取上清液于一支新的EP管中，加入一滴CB0226V-A（用10μL的枪头加入），涡旋混匀，冰浴放置30min后，16000g 4℃离心20min，取上清置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。
2.样本测定（在1mL玻璃比色皿中加入下列试剂）：

试剂名称	实验管（μL）
样本	175
CB0226V-E	75
工作液	750
混匀，立即记录600nm处初始吸光值A1和10min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1

四、ProDH活力单位的计算：
1.按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使600nm处吸光值变化0.01为一个酶活力单位。
ProDH (U/mg prot) = ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T = 57.14×ΔA÷Cpr
2.按样本鲜重计算：
单位定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使600nm处吸光值变化0.01为一个酶活力单位。
ProDH (U/g 鲜重) = ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T = 57.14×ΔA÷W
注：V反总：反应体系总体积，1mL；V样：加入样本体积，0.175mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。