PLC Assay Kit (Microanalysis)

磷脂酶C催化水解NPPC产生对硝基苯酚，在410nm处有特征吸收峰。

100T/96S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、天平、研钵、超速冷冻离心机、恒温水浴锅。

二、酶液提取
1.组织：按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL CB0286M-ES）加入CB0286M-ES，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL CB0286M-A。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0286M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL CB0286M-A。
3.血清：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30 min，调节波长到410nm，蒸馏水调零。
2.样本测定（在微量石英比色皿/96 孔板中加入）

四、PLC酶活计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0191x - 0.0103，R² = 0.9991
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性 (nmol/min/mg prot) = (ΔA+0.0103)÷0.0191×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 17.45×(ΔA+0.0103)÷Cpr
2.按照样本质量计算：
酶活性定义：每克组织每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性 (nmol/min /g 鲜重) = (ΔA+0.0103)÷ 0.0191×V反总÷(V样÷V样总×W) ÷T = 17.45×(ΔA+0.0103)÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义：每10⁴个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性 (nmol/min/10⁴ cell) = (ΔA+0.0103)÷ 0.0191×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T = 17.45×(ΔA+0.0103)÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性 (nmol/min/mL) = (ΔA+0.0103)÷ 0.0191×V反总÷V样÷T = 17.45×(ΔA+0.0103)
注：V反总：反应总体积，0.2mL；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min。

b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0095x - 0.0103，R² = 0.9991
1.按照蛋白浓度计算：
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性 (nmol/min/mg prot) = (ΔA+0.0103)÷0.0095×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 35.09×(ΔA+0.0103)÷Cpr
2.按照样本质量计算：
酶活性定义：每克组织每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性 (nmol/min /g 鲜重) = (ΔA+0.0103)÷ 0.0095×V反总÷(V样÷V样总×W) ÷T = 35.09×(ΔA+0.0103)÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义：每10⁴个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性 (nmol/min/10⁴ cell) = (ΔA+0.0103)÷ 0.0095×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T = 35.09×(ΔA+0.0103)÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC活性 (nmol/min/mL) = (ΔA+0.0103)÷ 0.0095×V反总÷V样÷T = 35.09×(ΔA+0.0103)
注：V反总：反应总体积，0.2mL；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。