Phenylalanine Ammonia-lyase Assay Kit (Microanalysis)

苯丙氨酸解氨酶 (PAL) 是催化直接脱掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。反式桂皮酸在波长290nm处有最大吸收值。如果酶的加入量适当，反式桂皮酸的生产速率即A290升高的速率可在几小时内保持不变，规定1小时内A290增加0.01为PAL的一个活力单位。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。

二、样品处理：
按照组织质量（g）：CB0111M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL CB0111M-ES），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.紫外分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到290nm，蒸馏水调零。
2.注意：空白管只需要测定1-2次。
3.在EP管或96孔板（UV板）中按顺序加入下列试剂：

四、PAL 活性计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
(1)按蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每 min 使 290nm 下吸光值变化 0.1 为一个酶活性单位。
PAL (U/mg prot) = ΔA×V反总÷(Cpr×V样)÷0.1÷T = 13.33×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每 min 使 290nm 下吸光值变化 0.1 为一个酶活性单位。
PAL (U/g 鲜重) = ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.1÷T = 13.33×ΔA÷W
注： V反总：反应体系总体积，200µL=0.2mL；V样：加入样本体积，5µL=0.005mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量(g)；
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下：
(1)按蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每 min 使 290nm 下吸光值变化 0.05 为一个酶活性单位。
PAL (U/mg prot) = ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.05÷T = 26.67×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每 min 使 290nm 下吸光值变化 0.05 为一个酶活性单位。
PAL (U/g 鲜重) = ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.05÷T = 26.67×ΔA÷W
注： V反总：反应体系总体积，200µL=0.2mL；V样：加入样本体积，5µL=0.005mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量(g)。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。