Peroxidase Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

POD 催化 H₂O₂ 氧化特定底物，在 470nm 有特征光吸收。

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、离心机、1ml玻璃比色皿、水浴锅、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。

二、粗酶液提取：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0128V-ES（mL）为 500~1000：1 的比例，建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0128V-ES，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；然后8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 470nm，蒸馏水调零。
2.试剂准备见产品组成及保存条件列表。
3.CB0128V-A/B/C 在37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）放置 10min。
4.在 1mL 玻璃比色皿中按列表中顺序加入上述试剂，

四、还原糖含量计算：
1.绘制标准条件：
根据标准管浓度和吸光度(A标准管-A空白管)建立标准曲线，x 为吸光度，y 为标准品浓度(mg/mL)。根据标准曲线计算样本中还原糖的含量，即将ΔA(A测定管-A对照管)带入 x 计算出 y 值。
2.计算公式：
(1)按样本鲜重计算：
还原糖 (μg/g 鲜重) =1000×y×V1÷W=2000×y÷W
(2)按样本蛋白浓度计算：
还原糖 (μg/mg prot) =1000×y×V1÷(V1×Cpr)= 1000× y÷Cpr
(3)按细菌或细胞密度计算：
还原糖 (μg/10⁴cell) =1000×y×V1÷1000=2×y
(4)按血清(浆)体积计算：
还原糖 (μg/mL) =1000×y×V2÷V3=10000×y
注：1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入CB0129V-A体积，2mL；V2：加入血清(浆)和CB0129V-A总体积，2mL；V3： 加入血清(浆)体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1000：细菌或细胞数量，1000万。

1.若一次性测定样本较多，可将CB0128V-A/B/C和蒸馏水按比例配成混合液，在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）放置 10min 以上，测定时加入 15µL 样本和 1055µL 混合液测定。
2.如果 ΔA 小于 0.005，可将反应时间延长到 5min。如果 ΔA 大于 0.5，可将样本用提取液稀释后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。