Name: NI Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0254M
Rating: 5 (4 reviews)

规格

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100 T

¥ 1,382

10-12日内发货

产品规格

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0254M-ES	100mL×1瓶	4℃保存；
CB0254M-A	20mL×1瓶	4℃保存；
CB0254M-B	粉剂×1 瓶	4℃保存；临用前加入10mL CB0254M-A充分溶解备用；剩余试剂4℃保存；
CB0254M-C	30mL×1瓶	4℃保存；
CB0254M-Standard	粉剂×1 支	用时加入 1 mL 蒸馏水充分溶解，制备 10 mg/mL 葡萄糖标准溶液待用；用不完的试剂 4℃保存一周。

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.按照组织质量（g）：CB0254M-ES体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL CB0254M-ES），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 520nm，蒸馏水调零。
2.标准品的制备：将标准品用蒸馏水稀释至2、1.5、1.2、1、0.8、0.5、0mg/mL（0mg/mL为空白管）。
3.样本测定，（在 EP 管中依次加入下列试剂）：

试剂名称	对照管（μL）	测定管（μL）	标准管（μL）	空白管（μL）
样本	50	50
标准溶液			50
蒸馏水	200			50
CB0254M-A	200	200	200	200
CB0254M-B		200	200	200
混匀，37℃准确水浴 30min
CB0254M-C	125	125	125	125
混匀，95℃水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中， 520nm 处记录各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数），分别记为 A对照管，A测定管，A标准管，A空白管。计算 ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管（标准曲线只需检测 1-2 次）。每个测定管需要设一个对照管。

四、NI 活性计算：
1.标准曲线的建立：以各浓度下吸光值减空白管(浓度为0mg/mL)的吸光度为y轴，葡萄糖浓度为x轴绘制标准曲线。根据标准曲线，将ΔA带入方程得到x(mg/mL)。
2.NI活性计算：
(1)按照蛋白浓度计算
单位的定义：37℃每mg 蛋白每分钟产生1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
NI活性 (μg/min/mg prot) = [x×V1]÷(V1×Cpr)÷T = 33.33x÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义：37℃每g 组织每分钟产生1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
NI活性 (μg/min/g 鲜重) = [x×V1]÷(W×V1÷V2)÷T =33.33x÷W
注：1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

注意事项

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。