NAG Assay Kit (Microanalysis)

NAG 分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG 活性。

100T/48S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0234M-ES体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0234M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量（g）：CB0234M-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0234M-ES），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.酶标仪或分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2.样本测定（在EP管或96孔板中依次加入下列试剂）：

四、NAG活性计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.00585x +0.0083；x为标准品浓度(nmol/mL)，y为吸光值。
1.血清(浆)NAG活力的计算
单位的定义：每mL 血清(浆)每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活力 (nmol /min/mL) = [(ΔA-0.0083)÷0.00585×V反总]÷V样÷T = 39.89×(ΔA-0.0083)
2.细胞、细菌和组织中NAG 活力的计算：
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性 (nmol/min/mg prot) = [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反总]÷(V样×Cpr)÷T = 39.89×(ΔA-0.0083)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性 (nmol/min/g鲜重) = [(ΔA-0.0083)÷0.00585×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T = 39.89×(ΔA-0.0083)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性 (nmol/min /10⁴cell) = [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T = 0.08×(ΔA-0.0083)
注：V反总：反应体系总体积，0.07mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V样总：加入CB0234M-ES体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；T：反应时间，30min。

b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0039x +0.0083；x为标准品浓度(nmol/mL)，y为吸光值。
1.血清(浆)NAG活力的计算
单位的定义：每mL血清(浆)每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活力 (nmol /min/mL) = [(ΔA-0.0083)÷0.0039×V反总]÷V样÷T = 59.83×(ΔA-0.0083)
2.细胞、细菌和组织中NAG活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min/mg prot) = [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反总]÷(V样×Cpr)÷T = 59.83×(ΔA-0.0083)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性 (nmol/min/g鲜重) = [(ΔA-0.0083)÷0.0039×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T = 59.83×(ΔA-0.0083)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性 (nmol/min /10⁴cell) = [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T = 0.12×(ΔA-0.0083)
注：V反总：反应体系总体积，0.07mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V样总：加入CB0234M-ES体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；T：反应时间，30min。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。