NADP-MDH Assay Kit (Microanalysis)

NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

二、样本准备：
1.细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0219M-ES体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0219M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：CB0219M-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0219M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.将CB0219M-A在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。
3.操作表（在微量石英比色皿/96孔板中加入下面试剂）：

四、NADP-MDH活性计算：

a. 用微量比色皿测定：
1.血清(浆)NADP-MDH活力的计算：
单位定义：每毫升血清(浆)每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH (U/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样÷T = 6430×ΔA
2.组织、细菌或细胞中NAD-MDH活力的计算：
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T = 6430×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 6430×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH (U/10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样÷V样总×500)÷T = 12.86×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，8×10^-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500万。

b. 用96孔板测定：
1.血清(浆)NADP-MDH活力的计算：
单位定义：每毫升血清(浆)每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH (U/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样÷T = 12860×ΔA
2.组织、细菌或细胞中NAD-MDH活力的计算：
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T = 12860×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 12860×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH (U/10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样÷V样总×500)÷T = 25.72×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，8×10^-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500万。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。