NAD-MDH Assay Kit (Microanalysis)

NAD-MDH催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。

100T/96S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

二、样本准备：
1.细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0218M-ES体积（mL）为1000~5000：1的比例（建议2000万细菌或细胞加入1mL CB0218M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：CB0218M-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0218M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.检测工作液的配制：用时在CB0218M-B中加入19mL CB0218M-A和0.5mL蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3.测定前将检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。
4.操作表

四、NAD-MDH活性计算：
1.血清(浆)NAD-MDH活力的计算：
单位的定义：每毫升血清(浆)每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=12860×ΔA
2.组织、细菌或细胞中NAD-MDH活力的计算：
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织中每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T =12860×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(2000×V样÷V样总)÷T=6.43×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.005 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；2000：细胞或细菌总数，2000万。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。