NAD Malic Enzyme(NAD-ME) Assay Kit (Microanalysis)

NADP-ME 催化 NAD⁺ 还原成 NADH，在 340nm 下测定 NADPH 增加速率。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。

二、样品制备：
1.细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min，调节波长至340nm。
2.将试剂A、B、C和D置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。如果一次性测定样本较多，
可将试剂A、B、C和D按下表比例配成混合液后置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上（混合液现配现用）。
3.酶促反应（按顺序加入下列试剂）：

四、计算公式：
a.使用石英比色皿测定：
1.按组织蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。
NADP-ME(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T= 4823×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2.按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟生成 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。
NADP-ME(U/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W× V样÷V样总) ÷T =4823×ΔA÷W
3.按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。
NADP-ME(U /10⁴cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总) ÷T =9.646×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，1.8×10^-4L；ε：NADP 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.006 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
b.使用96孔板测定：
1.按组织蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。
NADP-ME(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T= 9646×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2.按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟生成 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。
NADP-ME(U/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W× V样÷V样总) ÷T =9646×ΔA÷W
3.按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。
NADP-ME(U /10⁴cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总) ÷T =19.292×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，1.8×10^-4L；ε：NADP 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.006 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。