MDHm Assay Kit (UV Spectrophotometry)

MDHm催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。

50T/48S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。

二、样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1.称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL CB0241UV-A和10μL CB0241UV-C，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2.将匀浆600g，4℃离心5min。
3.弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4.上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的MDH（此步可选做）。
5.在步骤4中的沉淀中加入200μL CB0241UV-B和2μL CB0241UV-C，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体CS测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.将CB0241UV-D在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。
3.样本测定：

四、MDHm含量计算：

1. 按样本蛋白浓度计算

单位定义： 每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

公式：
MDHm (nmol/min/mg prot) = [ΔA × V_反总 ÷ (ε × d) × 10⁹] ÷ (V_样 × C_pr) ÷ T = 6430 × ΔA ÷ C_pr

2. 按样本鲜重计算

单位定义： 每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

公式：
MDHm (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA × V_反总 ÷ (ε × d) × 10⁹] ÷ (W × V_样 ÷ V_样总) ÷ T = 1299 × ΔA ÷ W

3. 按细菌或细胞密度计算

单位定义： 每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

公式：
MDHm (nmol/min/10⁴ cell) = [ΔA × V_反总 ÷ (ε × d) × 10⁹] ÷ (2000 × V_样 ÷ V_样总) ÷ T = 0.65 × ΔA

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。