ISP Assay Kit (Microanalysis)

利用带有螯合剂的酸溶液提取离子结合型果胶（ISP），采用咔唑比色法测定果胶含量。果胶水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应，生成物质在530 nm处有最大吸收峰。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、可调式移液器、80％乙醇、丙酮、浓硫酸（不允许快递）、研钵和蒸馏水。

二、酶液提取
1.细胞壁的提取：取约0.3g样本，加入1mL 80％乙醇，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（涡旋振荡2min左右，4000g 25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL CB0295M-A（去除淀粉）浸泡15小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，将沉淀干燥，称重得细胞壁物质（CWM）。
2.WSP的提取：称取烘干的CWM 3mg，加入1mL CB0295M-B，充分匀浆（若烘干物质质地坚硬，可先研碎后再加入1mL CB0295M-B匀浆，或者用匀浆器匀浆）。8000g 4℃离心10min，取上清液待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm处，蒸馏水调零；
2.CB0295M-C和CB0295V-D 37℃预热10min以上。
3.操作表（在EP管中依次加入）：

四、ISP含量计算：
ISP含量(mg /g 干重)= (C标准×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀释倍数= 0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数
注：C标准：标准管浓度，0.05mg/ml；V1：加入样本体积，0.05ml；V2：加入提取液体积，1ml；W：样本干重，g。
注意：最低检测限为50μg /g 干重

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。