HMGCS Assay Kit (Microanalysis)

HMGCS 催化乙酰CoA 与乙酰乙酰CoA 生成羟甲基戊二酰CoA，同时产生CoASH，使DTNB转化为黄色的TNB，在412nm 下有特征吸光值。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1.细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0242M-ES体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL CB0242M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：CB0242M-ES体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL CB0242M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2.样本测定（在微量石英比色皿或96孔板中加入）：

四、HMGCS酶活性计算：
a. 使用微量石英比色测定的计算公式如下：
1.血清（浆）活性
单位定义：每mL 血清（浆）每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U /mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹] ÷V样÷T = 36.76×ΔA
2.组织、细菌或细胞HMGCS 活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 36.76×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义：每g 组织每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 36.76×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1 万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/10⁴ cel) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T = 0.074×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：TNB 摩尔消光系数，1.36×10⁴ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入CB0242M-ES 体积，1mL；T：反应时间，4 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
蛋白定量检测建议使用本公司： BCA Protein Assay Kit

b. 使用96孔板测定的计算公式如下：
1.血清（浆）活性
单位定义：每mL 血清（浆）每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样÷T = 73.53×ΔA
2.组织、细菌或细胞HMGCS 活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 73.53×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义：每g 组织每分钟催化产生1nmolTNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 73.53×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1 万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol TNB 为一个酶活力单位。
HMGCS (U/10⁴ cel) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T = 0.147×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：TNB 摩尔消光系数，1.36×10⁴ L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入CB0242M-ES 体积，1 mL；T：反应时间，4 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。