Glutaminase Assay Kit (Microanalysis)

谷氨酰胺酶 (GLS) 催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。

二、粗酶液提取：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0122M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0122M-ES，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 420nm，蒸馏水调零。
2.样本测定，在 EP 管中加入下列试剂：

四、酶活性计算：
标准条件下测定的回归方程为 y =1.9244x + 0.0057，R² = 0.9983；；x 为标准品浓度(μmol/mL)， y 为吸光值 A
1.血清(浆)GLS 活性
单位定义：每 mL 血清(浆)每小时催化谷氨酰胺生成 1nmol氨定义为一个酶活力单位。
计算公式：GLS (U/mL) = (ΔA-0.0057) ÷1.9244×V反总÷V样÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)
2.组织、细菌或细胞 GLS 活性
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每 mg 蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成 1nmol氨定义为一个酶活力单位。
计算公式：GLS (U/mg prot) = (ΔA-0.0057) ÷1.9244×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位定义：每 g 组织每小时催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
计算公式：GLS (U/g鲜重) = (ΔA-0.0057)÷1.9244×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义：每 1 万个细菌或细胞每小时催化谷氨酰胺生成 1nmol氨定义为一个酶活力单位。
计算公式：GLS (U/10⁴ cell) = (ΔA-0.0057)÷1.9244×V反总 ÷(500×V样 ÷V样总 ) ÷T ×1000 =0.7274×(ΔA -0.0057)
注： V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，60min；V反总：反应体系总体积，1.05mL； V样：加入反应体系中样本体积，0.025mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500 万; 1000，μmol 到 nmol 换算系数。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。