Glucose oxidase Assay Kit (Microanalysis)

葡萄糖氧化酶催化产生 H₂O₂，过氧化物酶在有氧存在时催化 H₂O₂ 分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、天平、烘箱、离心机、可调式移液枪、冰和蒸馏水。

二、样品准备：
1.组织样品的制备：
组织处理：按照组织质量（g）：CB0083S-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL CB0083S-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.血清（浆）：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。
2.工作液的配制：用前取5ml CB0083S-A 和1ml CB0083S-B充分混匀，现配现用；
3.测定前将工作液和CB0083M-C在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。
4.在微量玻璃比色皿或96孔板中加入174μL工作液和 6μL CB0083M-C，立即混匀并在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；然后再加入20μL样本，加样本的同时开始计时，记录 500nm 下20s 吸光值 A1 和 2小时 20s 后的吸光值 A2，并计算 ΔA=A2-A1。

四、GOD 活力单位的计算：
a. 用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下
1 血清（浆）GOD 活力的计算
单位定义：每 mL 血清（浆）每小时催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。
GOD (U/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)]÷V样÷T = 0.667×ΔA
2 动物组织 GOD 活力的计算
(1)按蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白每小时催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。
GOD (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)]÷(V样×Cpr)÷T = 0.667×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织每小时催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。
GOD (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)]÷(W ×V样÷V样总)÷T =0.667×ΔA÷W
注：V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数，7.5mL /μmol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02 mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，2h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1.血清（浆）GOD 活力的计算
单位定义：每 mL 血清（浆）每小时催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。
GOD (U/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)]÷V样÷T =1.33×ΔA
2.动物组织 GOD 活力的计算
(1)按蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白每小时催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。
GOD (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)]÷(V样×Cpr)÷T =1.33×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织每小时催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。
GOD (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)]÷(W× V样÷V样总)÷T =1.33×ΔA÷W
注： V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数，7.5mL /μmol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

1.不同匀浆组织中 GOD 活力不一样，做正式实验之前请先进行预实验，若 A2-A1>1，则说明组织活力太高，必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液，使A2-A1＜1；若出现 A1> A2 现象，请将样本用提取液稀释成适当浓度。
2.最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。