GCDH Assay Kit (UV Spectrophotometry)

GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH，在340nm下测定NADH上升速率，即可反映GCDH活性。

50T/48S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。

二、样本处理：
1.组织的前处理：按照组织质量（g）：CB0232UV-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0232UV-ES），进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌或培养细胞的前处理：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0232UV-ES体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0232UV-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零；
2.工作液的配制：临用前将CB0232UV-B转移到CB0232UV-A中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
3.将工作液置于37℃预热5分钟；
4.样本测定（在微量石英比色皿/96孔板中加入下列试剂）：

四、GCDH活性计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1.按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 3215×ΔA÷Cpr
2.按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 3215×ΔA÷W
3.按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH (U/10⁴ cell ) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T =6.43×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

b. 用96孔板测定的计算公式如下：
1.按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 6430×ΔA÷Cpr
2.按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 6430×ΔA÷W
3.按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH (U/10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T = 12.86×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。