β-glucosidase Assay Kit (Microanalysis)

β-GC 分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0107M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0107M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量（g）：CB0107M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL CB0107M-ES），进行冰浴匀浆；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.液体样本直接使用。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零；
2.标准液的稀释：临用前将 5 μmol/mL 标准液用蒸馏水稀释至300、200、100、50、25、10、0 nmol/mL标准溶液待测；
3.加样表：

四、β-GC 活力计算：
1.标准曲线建立：
根据标准管的浓度(x，nmol/mL)和吸光度(y，ΔA标准)，建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA(y，ΔA测定)带入公式计算样本产物浓度x(nmol/mL)。
2.酶活力计算：
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GC活力(U/mg prot)=(x×V反总)÷(V样×Cpr)÷T=20x÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每克组织每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GC活力(U/g 质量) =(x×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T=20x÷W
(3)按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：每 1万个细菌或细胞每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β -GC活力(U/10⁴ cell)=(x×V反总)÷(500×V样÷V样总)÷T=0.02x
注：Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，蛋白浓度需要另外测定；V反总：反应体系总体积，0.3mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.03mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间，0.5h。

1.提取液中含有使蛋白变性的成分，故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。