Name: α-glucosidase Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0103M
Rating: 5 (4 reviews)

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100 T

¥ 1,512

4-6日内发货

产品规格

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

名称	规格	储存条件
CB0103M-ES	液体 100mL×1瓶	4℃保存
CB0103M-A	粉剂×2瓶	-20℃保存；临用前取1瓶加入6mL 蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。
CB0103M-B	液体 15mL×1瓶	4℃保存
CB0103M-C	液体 15mL×1 瓶	4℃保存
CB0103M-Standard (5 μmol/mL)>	液体 1mL×1 支	4℃保存

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0103M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0103M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量（g）：CB0103M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0103M-ES），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。
2.标准溶液的稀释：将 5μmol/mL 的标准液用蒸馏水稀释成 200、150、100、50、25、12.5、0 nmol/mL 标准溶液待测。
3.样本测定（在 EP 管中依次加入下列试剂）：

试剂名称	测定管（µL）	对照管（µL）	标准管（µL）
CB0103M-A	100
CB0103M-B	150	150
样本	30	30
充分混匀，37℃准确水浴 30min 后，立即放入 95℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）
CB0103M-A		30
充分混匀，8000g，4℃，离心 5min，取上清液待测
上清液	70	70
标准品			70
CB0103M-C	130	130	130
充分混匀，室温静置 2min 后，于 400nm 处测定吸光值 A，分别记为 A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算 ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管，标准曲线和空白管只需测 1-2 次。

四、α-GC活力计算：
根据标准管的浓度(x，nmol/mL)和吸光度(y，ΔA标准)，建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA(y，ΔA测定)代入公式计算样本产物浓度x(nmol/mL)。
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GC 活力 (U/mg prot) =(x×V反总)÷(V样×Cpr)÷T=18.67x÷Cpr

(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GC 活力 (U/g 鲜重) =(x×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T=18.67x÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GC 活力 (U/10⁴ cell) =(x×V反总)÷(500×V样÷V样总)÷T=0.0374x
注： Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.28mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.03mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g； 500：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间，0.5h。

注意事项

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。