α-AL Assay Kit (Microanalysis)

淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖，还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质，在540 nm有吸收峰；通过测定540 nm吸光度增加速率，计算淀粉酶活性。α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
组织：称取0.1~0.2g样本（建议称取约0.1g样本），加1 mL蒸馏水匀浆；将匀浆倒入离心管中，在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；3000g，25℃离心10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至10 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。
血清（浆）：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长到540 nm，蒸馏水调零。
2.标准液的稀释：将葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为1.25、1、0.75、0.5、0.25、0.1 mg/mL 的标准溶液。
3.CB0245M-A和CB0245V-B 40℃预热10min。
4.测定步骤（在EP管中依次加入下列试剂）：

四、α-淀粉酶活性计算：
1.标准曲线的绘制：
以标准液的浓度(mg/mL)为 x 轴，对应的 ΔA标准为 y 轴绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将 ΔA测定代入方程中计算得到样本浓度(x，mg/mL)。
2.α-淀粉酶活性的计算：
2.按照样本质量计算
单位定义：每g 组织每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(U/g 质量)=x×V样÷(W×V样÷V样总)÷T=2×x÷W
3.按照蛋白质浓度计算
单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(U/mg prot)= x×V样÷(V样×Cpr)÷T=0.2×x÷Cpr
V样：加入反应体系中样本体积，0.075mL；V样总：提取液总体积，10mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。