原液制备：1. 蛋白准备：为实现最佳标记效果，请将蛋白（抗体）浓度配制至2 mg/mL。1) 确保蛋白溶液的pH值为8.5±0.5，若低于8.0，可用1 M碳酸氢钠调整。2) 若蛋白浓度低于2 mg/mL，会显著降低标记效率，建议最终蛋白浓度在2-10 mg/mL之间。3) 蛋白必须溶解在不含伯胺（如Tris或甘氨酸）和铵离子的缓冲液中，以免影响标记效率。2. 染料准备：用无水DMSO稀释VF染料，制成10 mg/mL的储备溶液，并通过玻璃管或旋涡充分混合。注意：建议将VF储备溶液分装后于-20 ℃或-80 ℃避光保存。3. 染料工作液用量计算：VF染料用量取决于标记蛋白的量，理想的VF染料与蛋白摩尔比为10。例如：若欲标记500 μL 2 mg/mL的IgG（MW=150,000），可用100 μL DMSO溶解1 mg的VF染料，则所需VF体积为3.95 μL，详细计算流程如下（以VF 488为例）：1) mmol (IgG) = mg/mL (IgG)×mL (IgG) / MW (IgG) =2 mg/mL×0.5 mL / 150,000 mg/mmol= 6.7×10 -6 mmol 2) mmol (VF 488) = mmol (IgG)×10 =6.7×10 -6 mmol×10 = 6.7×10 -5 mmol 3) μL (VF 488) = mmol (VF 488)×MW (VF 488) / mg/μL (VF 488) = 6.7×10 -5 mmol× 834 mg/mmol / 0.01 mg/μL = 5.6 μL (VF 488)。使用方法：1. 标记反应：1) 将按计算体积的新鲜10 mg/mL VF染料缓慢加入0.5 mL蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心以收集样品于反应管底部，避免剧烈混合以防蛋白变性失活。2) 将反应管置于避光处，室温下轻轻摇晃孵育60分钟，期间每隔10-15分钟轻轻颠倒几次以充分混合，提高标记效率。2. 蛋白纯化脱盐：此方案采用Sephadex G-25柱纯化染料-蛋白偶联物为例。1) 按照说明书准备Sephadex G-25柱。2) 将反应混合物装入Sephadex G-25色谱柱顶部。3) 当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入PBS (pH 7.2-7.4)。4) 加入更多的PBS以完成柱纯化，收集所需的染料-蛋白质缀合物组分。保存条件：-20℃避光保存。注意事项：1. VF染料对光及湿度敏感，现用现配VF溶液，丢弃未使用部分。2. 低浓度叠氮化钠（≤3 mM或0.02％）或硫柳汞（≤0.02 mM或0.01％）对蛋白标记无显著影响，但20-50％的甘油会降低标记效率。3. 使用不含伯胺（例如Tris，甘氨酸）或铵离子的缓冲液，以避免竞争反应降低标记效率。4. 本产品仅用于专业人员的科学研究，不得用于临床诊断或治疗、食品或药品。5. 为了您的安全和健康，在操作时请穿实验服并戴一次性手套。