TRITC-DHPE可用作单层小泡并标记细胞。流式细胞术实验方案：1.将TRITC-DHPE探针溶于乙醇；2.用电穿孔缓冲液超声并稀释探针，再次超声以制备最终浓度为4.6 μM的探针储备液；3.在一个T-75瓶中加入15 mL探针储备液，在37℃标记细胞2.5小时；4.用PBS洗涤细胞两次，胰酶消化细胞，再次洗涤细胞后进行分析；5.将细胞转成Ca 2+、Mg 2+ -自由PBS中，使用流式细胞仪以514 nm激光和585/42 nm滤光片进行分析；6.调整水性悬浮液pH范围为4-6.5；7.构建TRITC-DHPE pH-无关发射标准曲线，设置激发波长为514 nm，发射波长为580 nm，缝宽为4 nm。TRITC-DHPE制备方案：1.将TRITC-DHPE储存于氯仿中（1 mg/ml, 储备）；2.在使用前立即将染料储备液（1-5 μL）干燥成膜状，并在20-100 μL乙醇中重建；3.以最终浓度为100 nM-1 μM在22℃含有FCS的RPMI 1640培养基中孵育细胞5-10分钟；4.孵育过程中乙醇的最大浓度为1% v/v。