外泌体蛋白的生物素化
一、溶液配置
1.母液配置：将Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin溶解在DMSO中，配置成10-100mM的母液。
2.工作液配置：使用水/PBS等其他溶剂将Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin母液稀释到实验所用的工作液浓度。
注意事项：
1.母液需要分装放在-20℃或者-80℃，避免反复冻融。
2.请您根据您的实验目的将母液稀释至所需浓度。
二、操作步骤
1.将 200 μg 完整外泌体与 10 mM的Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin在室温下混合 30 分钟。
2.本实验考虑了四个条件：
1）使用过量的 Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin来支持暴露的赖氨酸残基和潜在 N 末端的完全饱和。
2）Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin中存在的磺酸盐基团阻止试剂穿透外泌体膜。
3）Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin具有 30.5 埃的间隔臂，可改善蛋白质在其自然构象中的生物素化。
4）用 Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin标记的氨基酸将增加 452 Da 的质量。
三、孵育后，可以使用 10 KDa的MWCO 过滤装置去除过量的 Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin。[2]