基于凝胶ABPP方法的原位标记样品处理 [2]

1. 将细胞在冰上解冻，在每个样品中加入 200 μL 冷 DPBS和蛋白酶抑制剂，用探针超声仪裂解细胞，并以 100,000 × g 离心45 分钟分离。
2. 取上清液 (可溶性蛋白质组)超声重悬于 200 μL 冷 DPBS和蛋白酶抑制剂中，然后将每个样品的蛋白质浓度标准化为 1 mg/mL，体积为 43 μL。
3. 对每个样品进行点击化学反应，使用最终浓度为 25 μM Rhodamine-N3 chloride、1 mM TCEP、100 μM TBTA 和 1 mM CuSO4 的溶液，最终体积为 50 μL。室温孵育1小时。
   4.向样品加入 20 μL 4X SDS 上样缓冲液，以30 μL体积上样，在 10% SDS-PAGE 凝胶上进行电泳，并使用荧光扫描仪进行成像。