PNPP is a non-proteinaceous chromogenic substrate for alkaline and acid phosphatases used in ELISA and conventional spectrophotometric assays.

使用方法
一、溶液配置
1.储备液配置：将PNPP粉末溶解于适当的缓冲液中，常用浓度为5–10 mM。推荐使用含有50 mM Tris-HCl和10 mM MgCl₂的缓冲液，pH值调整至9.5，以适合碱性磷酸酶的活性。
2.工作液配置：根据实验需要，将储备液稀释至所需浓度，通常为2–5 mM。
二、操作步骤
1. 反应条件：
温度： 37°C。时间： 10–30分钟，具体时间需根据实验优化。
2. 检测方法：
1）在酶的作用下，PNPP被水解生成黄色的对硝基苯酚，其在405 nm处有最大吸收峰。
2）使用分光光度计在405 nm处测定吸光度，以评估酶的活性。
注意事项：
新鲜配制： PNPP溶液应现用现配，避免长时间存放以防止水解。
避光保存： PNPP对光敏感，操作过程中应避免强光照射。
终止反应： 在ELISA实验中，反应结束后可加入等体积的0.1 M NaOH或0.1 M EDTA终止反应。