Pentafluorobenzenesulfonyl fluorescein itself no fluorescence, but were in the H2O2 in sulfonyl key fluoresce when hydrolyzed. Pentafluorobenzenesulfonyl fluorescein is often treated as selective H2O2 sensors, can be used for the detection of H2O2 content in the cell.

使用方法:
1. 制备探针溶液：通常将 PFSF 溶解在无水 DMSO 中，配制成储备液（如 1–10 mM），然后根据实验需求稀释至工作浓度（通常为 1–10 µM）。
2. 样品处理：
1）细胞实验中，将 PFSF 加入培养基中（通常在含 1% FBS 的无酚红培养基中使用，以避免荧光背景干扰），然后孵育细胞 30 分钟至 1 小时，37°C，避免光照。
2）对于化学或溶液实验，可直接将 PFSF 与目标体系（如含有 H₂O₂ 的缓冲溶液）混合。
3. 荧光检测：
荧光激发波长：490–500 nm，发射波长：515–530 nm。
可用荧光显微镜、荧光分光光度计或荧光板检测仪记录信号。
4. 校准与对照：
1）建议设置无 H₂O₂ 对照组和 H₂O₂ 标准曲线以验证信号特异性。
2）为确保探针特异性，可加入过氧化氢酶 (Catalase) 消除 H₂O₂ 干扰。
注意事项
1）储存条件：PFSF 应存储在 -20°C 避光条件下，使用前充分溶解。
2）实验环境：避免高温和强光直接照射，以防探针分解或自发荧光增加。
3）选择性验证：除了 H₂O₂，探针可能对其他强氧化剂（如过氧亚硝酸盐）有轻微反应，应根据实验需求验证特异性。