NBD-Pen is a fluorescent probe that detects lipid free radicals in living cells.

使用方法
一、试剂准备
1.溶剂： NBD-Pen 通常以粉末形式提供，在使用前需要用适当的溶剂（如二甲基亚砜 (DMSO) 或乙醇）溶解。
2.浓度： 为了准备工作溶液，常用浓度范围为 10-50 µM。具体浓度可以根据实验要求进行调整。
二、操作步骤
1.细胞处理：
1）细胞培养： 将待处理的细胞种植在适合的培养基中，常见的如 DMEM 或 RPMI-1640，培养24小时使细胞适应。
2） NBD-Pen 标记： 将溶解后的 NBD-Pen 溶液加入细胞培养基中，确保其浓度处于工作范围内。通常，细胞在37°C下孵育 30 分钟至1小时，确保NBD-Pen被细胞吸收。
3）洗涤： 孵育结束后，使用PBS缓冲液或细胞培养基轻轻清洗细胞，以去除未进入细胞的探针。
2.荧光检测：
1）荧光显微镜： 使用荧光显微镜进行检测，NBD-Pen 的激发波长约为 460 nm，发射波长约为 530 nm。脂质自由基的生成会导致荧光信号的强烈增强。
2）流式细胞术： 也可以使用流式细胞术对处理后的细胞进行荧光检测，观察细胞内荧光的变化。
3. 数据分析：
1）荧光强度： 通过对细胞中荧光强度的分析，可以评估细胞内脂质自由基的生成程度。荧光强度越高，表明脂质过氧化反应越显著。
2）标准曲线： 在一些定量实验中，可以通过建立标准曲线来进一步量化脂质自由基的浓度。
注意事项：
1.溶解性： NBD-Pen 溶解度较好，但应确保所使用的溶剂不会对细胞的活性造成负面影响。
2.荧光漂白： 在进行荧光显微镜观察时，应避免长时间强光照射，以防探针荧光信号的漂白。
3.实验控制： 在实验中需要设置空白组和对照组，以确保实验数据的准确性。