1.溶液的准备：
储备液：在高质量无水DMSO中制备2至5mM的Mag-Fluo-4 AM储备液。
工作液：在实验当天，将Mag-Fluo-4 AM溶解于DMSO中，或将储备液解冻至室温，然后在选择的缓冲液（如Hanks缓冲液或Hepes缓冲液）中制备2至20μM的Mag-Fluo-4 AM工作液，并加入0.04%的Pluronic（8F-127）。对于大多数细胞系，建议Mag-Fluo-4 AM的最终浓度为4至5μM。
2.细胞准备：在生长培养基中培养细胞过夜。
3.染料加载：第二天，向细胞培养板中加入1X Mag-Fluo-4 AM工作液。如果化合物可能干扰血清，需在染料加载前用新鲜的HHBS缓冲液替换生长培养基。
4.孵育：将含染料的培养板置于37°C的细胞培养箱中孵育30至60分钟。
5.去除多余探针：用HHBS或选择的缓冲液（如果适用，可加入阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM的probenecid）替换染料工作液，以去除多余的探针。
6.刺激与荧光测量：根据需要添加刺激物，并使用配备FITC滤光片组的荧光显微镜或带有可编程液体处理系统的荧光板读取器，在Ex/Em=490/525nm，截止波长515nm的条件下测量荧光。