Fluorescein Biotin is a biotin-substituting fluorescent dye that detects and quantifies biotin binding sites by fluorescence or absorbance.Fluorescein Biotin undergoes fluorescence quenching when bound to avidin or streptavidin.

使用方法
1. 溶液制备
储备液：将 Fluorescein Biotin 溶解于无水 DMSO 或水中，配制成 1–10 mM 的储备液。
工作液：使用实验缓冲液（如 PBS，pH 7.4）稀释至 1–10 µM 的工作浓度。
2. 应用步骤
a. 检测生物素结合位点
将目标蛋白或分子（通常是与抗生物素蛋白或链霉亲和素偶联的物质）与 Fluorescein Biotin 溶液混合，孵育 30 分钟至 1 小时，室温或 4°C，避免光照。
洗涤样品以去除未结合的 Fluorescein Biotin（如使用含 0.05% Tween-20 的 PBS）。
b. 荧光检测
激发波长：485–495 nm
发射波长：515–525 nm
荧光显微镜、流式细胞仪或荧光分光光度计均可用于检测信号。
c. 荧光淬灭研究
将 Fluorescein Biotin 溶液与抗生物素蛋白或链霉亲和素混合后，观察荧光强度变化。淬灭程度通常与结合效率相关，可用于量化生物素结合位点的密度。
3. 校准与对照
设置未结合的 Fluorescein Biotin 对照，以区分特异性结合信号与非特异性背景信号。
建立浓度梯度标准曲线，校准荧光信号与结合位点数量的关系。
4. 注意事项
储存条件：Fluorescein Biotin 应储存于 -20°C 避光环境，避免反复冻融。
避免光漂白：实验过程中尽量避免强光直射，以免荧光信号减弱。
缓冲液选择：使用 pH 中性的缓冲液以确保荧光团稳定性。