Flubida-2在DMSO中溶解（浓度约为2 mM）。然后将原液与20%（w/v in DMSO）的Pluronic F-127（Molecular Probes）1:1混合，之后用无血清的DMEM稀释至所需的最终浓度（2-4 μM）。在转染AV-KDEL或ST-AV DNA后30到48小时，HeLa细胞用无血清的DMEM漂洗一次，然后加载2-4 μM Flubida-2，加载时间为3-5小时（或过夜加载10-15小时）。随后，以正常生长培养基孵育这些标记细胞至少2小时，使多余的染料-生物素从细胞质中排出。由于强大的avidin-biotin相互作用，确保了稳定且特异的avidin-Flubi结合，即使在清洗过程中也很坚固。在Flubida-加载之前，细胞无需生物素饥饿，因为染色效果明亮且稳定。