DiSC3(5) is a lipophilic cationic fluorescent probe sensitive to changes in membrane potential. 3,3'-Dipropylthiadicarbocyanine iodide accumulates in hyperpolarized cell membranes, leading to fluorescence quenching; when the membranes are depolarized, the dye is released from the cells and the fluorescence intensity is enhanced, which is used for real-time monitoring of mitochondrial membrane potential changes and membrane hyperpolarization. The maximum excitation/emission wavelength was 622/670 nm.

使用方法
一、溶液配置
1.母液配置：DiSC3(5) 母液在 DMSO 或 EtOH 中以 1-5 mM 制备。
注意事项：母液溶液的未使用部分应储存在 -20℃。 避免反复冻融。
2.工作液配置：将母液稀释到合适的缓冲液中，如纯的 DMEM， HBSS 或 PBS ，制成 1 至5 uM 的工作液。
注意事项：对于不同的细胞类型和/或实验条件，应根据经验确定工作溶液的浓度。建议在至少超过十倍范围的浓度下进行测试。
二、操作步骤
1. 染色悬浮细胞：
1） 在染料工作溶液中悬浮细胞密度为 1×10^6/ mL。
2 ）在 37°C 孵育 2-20 分钟。 培养时间取决于细胞类型。 首先孵育 20 分钟，然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。
3 ）将标记的悬浮管以 1000 至 1500rpm 离心 5 分钟。
4 ）去除上清液，轻轻地将细胞重新悬浮在预热（37°C）的生长培养基中。
5 ）洗涤两次。
2. 染色贴壁细胞：
1 ）在无菌玻璃盖玻片上培养贴壁细胞。
2 ）从生长培养基中取出盖玻片，轻轻地排出多余的培养基。将盖玻片放在湿度箱中。
3 ）将100 μL 染料工作溶液吸移到盖玻片的角落，轻轻搅拌直至所有细胞都被覆盖。
4 ）将盖玻片在 37°C 孵育 2-20 分钟。 培养时间根据细胞类型而变化。开始孵育 20 分钟，然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。
5 ）排出染料工作溶液，用生长培养基清洗盖玻片两到三次。对于每个洗涤循环，用预热的生长培养基覆盖细胞，孵育 5-10 分钟，然后排出培养基。
三、显微镜检测。
四、流式细胞仪检测：用 DiS 标记的细胞可使用常规 FL3 流式细胞仪检测通道进行分析。